La PCR cuantitativa (qPCR) o PCR en tiempo real (real time PCR) es una modalidad de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, según sus siglas en inglés) utilizada para amplificar y simultáneamente detectar el producto de la amplificación de ácidos nucleicos. Esto se consigue incorporando moléculas fluorescentes que se asocian a los ácidos nucleicos amplificados, de manera que el incremento de la fluorescencia es proporcional al incremento de la cantidad de moléculas de ADN/ARN amplificadas en la reacción.

Se trata de una técnica sencilla y fiable que se puede aplicar a diferentes campos en la biología moderna y las ciencias relacionadas. La PCR en tiempo real se puede utilizar para el diagnóstico de enfermedades, tales como enfermedades infecciosas, cáncer y anormalidades genéticas. La introducción de ensayos de PCR cuantitativa en laboratorios de microbiología ha mejorado el diagnóstico de enfermedades infecciosas y se utiliza además como herramienta para detectar nuevas enfermedades emergentes.

La técnica de PCR en tiempo real puede llevarse a cabo utilizando ADN y ARN de diferentes fuentes como tejidos y microorganismos, incluyendo sangre periférica, piel, pelo, saliva y bacterias o virus. Solamente se necesitan trazas de ADN/ARN para generar copias suficientes y así poder ser detectadas por la fluorescencia generada. Por esta razón, la técnica de PCR es muy sensible, así que es extremadamente importante mantener buenas prácticas de laboratorio, especialmente en lo refrente a higiene, orden y seguridad en cualquiera de las fases de la técnica (extracción de ácidos nucleicos, preparación de las reacciones y detección del material amplificado), con el fin de evitar posibles contaminaciones que pueden afectar al resultado del test.
Para minimizar este problema existen ciertas condiciones que deben ser controladas, como:

· Zonas de trabajo diferentes para separar las zonas con amplicones de las zonas libres de ellas.
· Set de equipamiento independientes que no deben compartirse entre áreas (micropipetas, gradillas, batas, guantes, rotuladores, microtubos, centrífugas, neveras, etc.).
· Mantenimiento de un flujo unidireccional de trabajo desde las zonas más limpias hasta las más sucias.
· Flujos de aire con presiones positiva y negativa según el área.
· Materiales (puntas de micropipeta, microtubos, etc) de calidad PCR, libres de ADN exógeno, DNAsas y RNAasas.
· Puntas de micropipeta con filtro para reducir el riesgo de contaminación por formación de aerosoles.
· Limpieza de la superficie utilizada para preparar las reacciones de PCR con etanol (70 %) y, si es posible, descontaminarse con radiación ultravioleta antes y después de cada preparación (15 a 30 min).

El video muestra un ejemplo de cómo se debería preparar una PCR correctamente, mostrando las diferentes zonas por las diferentes actividades.

свернуть