Extrai os pigmentos apolares do espinafre com uma mistura de solventes e separei em coluna cromatográfica.
Materiais Reagentes
funil gral e pistilo éter de petróleo ou hexano
béquer acetona
coluna cromatográfica folhas de espinafre
proveta alumina ou sílica
placa de aquecimento
pipeta
Preparação da amostra
Pese 50 g de folhas de espinafre em um béquer, adicione 100 mL de água destilada e ferva por 1-2 minutos para remover a camada superficial das folhas. Decante o líquido e seque as folhas com papel absorvente. Transfira o material para um gral e verta 10 mL de uma mistura de éter de petróleo e acetona (8:2), triturando para obter uma solução verde.
Preparação da coluna
Para determinar a quantidade de alumina (ou sílica) utilizada, preencha a coluna até 2/3 da capacidade com a alumina e depois transfira este material para um béquer de 100 ml e junte éter de petróleo até a marca de 20 ml. Transfira esta suspensão para a coluna com o auxílio de uma espátula e abra a torneira para permitir o empacotamento da alumina. Adicione mais solvente para transferir o sólido.
Observe que o nível do eluente deve ser mantido sempre acima do nível da fase estacionária e para isso regule a torneira e a adição de solvente.
Separação dos pigmentos
Deixe o eluente escoar até o nível da fase estacionária e adicione cerca de 2 mL da solução de pigmentos com uma pipeta e deixe que a camada superior da fase estacionária entre na coluna. Coloque 1 cm de alumina (ou sílica, ou mesmo areia seca) sobre a camada de extrato.
Inicie a eluição com a mistura de éter de petróleo: acetona 40:60, adicionando o eluente aos poucos. Recolha as primeiras frações para um frasco de resíduos orgânicos – observa-se de imediato a descida de um anel amarelo (carotenos) ao longo da coluna. Na parte superior fica um anel verde, formado principalmente pela clorofila.
Recolha para um tubo de ensaio a banda amarela. Quando toda a banda amarela tiver saído da coluna, inicie a adição de acetona pelo topo da coluna. Observe que a banda verde se desloca e quando estiver saindo da coluna, recolha em outro tubo de ensaio.
Resíduos
Os resíduos de solventes orgânicos devem ser descartados em resíduos orgânicos não-clorados e separados dos resíduos aquosos.
